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罐体灭菌前都需要进行什么准备工作

发布时间:2019.05.09     浏览次数:     资讯来源:/

接种对罐体进行降温,冷却到30℃左右;接种;在进样孔旁围上一圈脱脂棉,倒上酒精,点火对加样孔进行灭菌,灭菌后,由 进样孔进行接种。开始发酵设置参数,温度设置在37℃,打开循环水路的阀门,水龙头关小,开始发酵;取样;没两小时取样一次,取样前要相对管道进行灭菌,打开取样器的阀门,打开蒸 汽进口阀,对管道灭菌15min,在冷却5min后方可取样,每次取样前都要对管道进行灭菌。

1.灭菌前: 室温下校准PH电极,先校6.86零点再4.0斜率(若的发酵pH很长时间是酸性的(如酵母发酵)用6.86校正零点,4.0校正斜率;若你的发酵pH很长时间是碱性的(如某些细菌发酵)用6.86校正零点,9.18校正斜率); 室温下校准溶氧电极,1.0点在不接溶氧电极时候标定,100%点接上溶氧电极,放置在空气中较定;或2.0点在灭菌过程中,温度达到121度左右压力0.12mpa左右时候标定,100%在灭菌结束,降温至发酵温度并稳定,转速在发酵初始转速,通气量在发酵初始通气量时候标定 灭菌: 1.灭菌,先将各排气阀打开,将蒸汽引入夹套或蛇管进行预热,待罐温升至80~90℃,将排气阀逐渐关小。接着将蒸汽从进气口、排料口、取样口直接通入罐中(如有冲视罐也同时进汽),使罐温上升到118~120℃,罐压维持在0.09~0.1Mpa(表压),并保持30min左右。

2.保温结束后,依次关闭各排汽、进汽阀门,待罐内压力低于空气压力后,向罐内通入无菌空气,在夹套或蛇管中通冷却水降温,使培养基的温度降到所需的温度,进行下一步的发酵和培养。(注意压力:灭菌时,总蒸汽管道压力要求不低于0.3~0.35Mpa,使用压力不低于0.2Mpa。) 灭菌后: A.消耗甘油阶段 1.灭菌后冷却30℃时:2.冷却至30℃时,开启搅拌(转速最大)和通气(0.1-1.0vvm),接通28%氨水(未稀释)调PH5.0;每升加4.35ml的无菌PTM1基础盐; 3.从摇瓶中接种种子液,DO值为100%,开始培养后会消耗,导致DO值下降,通氧气以确保DO值超过20%,速率先为0.1vvm。4.发酵过夜甘油被完全消耗(18-24h),标志为DO值增加到100%。

3.每天至少两次取样,测OD600,湿重,显微观察.将菌体和上清(离心后)在-80℃下保藏,用于后面的分析 5.这个阶段所希望达到的细胞产量为90-150g/L湿细胞。重组蛋白质不产生。 B.甘油补料阶段1.将12ml/LPTM1加入50%VVM的甘油中,将补料速率设为18.15ml每小时每升初试发酵液体积。 2.甘油补料将进行约4h或更长。在本阶段完成后细胞产量应达到180-220g/L湿细胞,但是不会有重组蛋白质的产生。 4%甘油的是所建议的在补料中的最大水平,更高的甘油浓度将会产生毒害问题。

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